Súprava na genómovú DNA TGuide Bacteria

A-1 Nízka koncentrácia buniek alebo vírusu vo východiskovej vzorke-Obohaťte koncentráciu buniek alebo vírusov.

A-2 Nedostatočná lýza vzoriek-vzorky neboli dôkladne premiešané s lýzovacím pufrom. Odporúčame dôkladne premiešať 1-2 krát pulzným vortexovaním. —Nedostatočná lýza buniek spôsobená poklesom aktivity proteinázy K. –Nedostatočná lýza buniek alebo degradácia proteínu v dôsledku nedostatočného času teplého kúpeľa. Odporúča sa rozrezať tkanivo na malé kúsky a predĺžiť dobu kúpeľa, aby sa odstránili všetky zvyšky z lyzátu.

A-3 Nedostatočná adsorpcia DNA. —Predtým, ako bol lyzát prenesený do rotačnej kolóny, nebol pridaný žiadny etanol alebo nízke percento namiesto 100% etanolu.

A-4 Hodnota pH elučného pufra je príliš nízka. -Upravte pH na 8,0-8,3.

Zvyškový etanol v eluáte.

—V eluente je zvyškový premývací pufer PW. Etanol sa môže odstrániť odstreďovaním rotačnej kolóny 3-5 minút a potom umiestnením na izbovú teplotu alebo inkubátorom na 50 ° C na 1-2 minúty.

A-1 Vzorka nie je čerstvá. —Vytiahnite pozitívnu vzorku DNA ako kontrolu, aby ste určili, či sa DNA vo vzorke degradovala.

A-2 Nesprávne predbežné ošetrenie. —Príčinou je nadmerné mletie kvapalného dusíka, opätovné získanie vlhkosti alebo príliš veľké množstvo vzorky.

Predbežné úpravy by sa mali pre rôzne vzorky líšiť. Pokiaľ ide o vzorky rastlín, uistite sa, že ste ich dôkladne rozomleli v tekutom dusíku. V prípade vzoriek zvierat homogenizujte alebo dôkladne rozomlejte v tekutom dusíku. Pri vzorkách s ťažko rozbitnými bunkovými stenami, ako sú baktérie G+ a kvasinky, sa na lámanie bunkových stien odporúča použiť lyzozým, lytikázu alebo mechanické metódy.

Súprava 4992201/4992202 Plant Genomic DNA Kit používa metódu založenú na stĺpci, ktorá na extrakciu vyžaduje chloroform. Je obzvlášť vhodný pre rôzne vzorky rastlín, ako aj pre suchý prášok rastlín. Hi-DNAsecure Plant Kit je tiež na báze stĺpcov, ale bez potreby extrakcie fenol/chloroformom je bezpečný a netoxický. Je vhodný pre rastliny s vysokým obsahom polysacharidov a polyfenolov. 4992709/4992710 DNAquick Plant System používa metódu na kvapalnej báze. Tiež nie je potrebná extrakcia fenolom/chloroformom. Postup čistenia je jednoduchý a rýchly bez obmedzenia počiatočných množstiev vzorky, takže používatelia môžu množstvo flexibilne upraviť podľa experimentálnych požiadaviek. Veľkého rozsahu gDNA fragmentov je možné získať s vysokým výťažkom.

Genomická DNA bola extrahovaná z rôznych objemov vzoriek ľudskej plnej krvi pomocou súpravy TIANamp Blood DNA Kit. Výsledky sú nasledovné. Výsledky sú uvedené len ako referenčné, skutočné výsledky extrakcie závisia od podmienok vzoriek.

Extrakciu DNA krvnej zrazeniny je možné vykonať pomocou činidiel poskytnutých v týchto dvoch súpravách jednoduchou zmenou protokolu na špecifickú inštrukciu na extrakciu DNA krvnej zrazeniny. Mäkkú kópiu protokolu o extrakcii krvnej zrazeniny DNA je možné vydať na požiadanie.

Čerstvú vzorku suspendujte v 1 ml PBS, normálnom fyziologickom roztoku alebo pufri TE. Vzorku úplne homogenizujte homogenizátorom a zrazeninu zozbierajte na dno skúmavky odstredením. Supernatant zlikvidujte a zrazeninu resuspendujte s 200 μl pufra GA. Nasledujúce čistenie DNA je možné vykonať podľa pokynov.

Na čistenie gDNA vo vzorkách plazmy, séra a telesnej tekutiny sa odporúča súprava TIANamp Micro DNA Kit. Na čistenie gDNA vírusu zo vzoriek séra/plazmy sa odporúča súprava TIANamp Virus DNA/RNA Kit. Na čistenie bakteriálnej gDNA zo vzoriek séra a plazmy sa odporúča súprava TIANamp Bacteria DNA Kit (pre pozitívne baktérie by mal byť zahrnutý lyzozým). Na vzorky slín sa odporúča Hi-Swab DNA Kit a TIANamp Bacteria DNA Kit.

Na extrakciu genómu húb sa odporúča DNAsecure Plant Kit alebo DNAquick Plant System. Na extrakciu kvasinkového genómu sa odporúča TIANamp Yeast DNA Kit (lytikáza by sa mala pripraviť samostatne).