2 × HotStart Taq PCR Mix

Tento výrobok obsahuje DNA polymerázu HotStart Taq, dNTPs, MgCl2, reakčný pufer, zosilňovač PCR, optimalizátor a stabilizátor, s koncentráciou 2 ×. Má výhody vysokej rýchlosti zosilnenia, jednoduchosti, vysokej citlivosti, silnej špecifickosti, dobrej stability a podobne a v najväčšej miere môže obmedziť chyby v prevádzke. Je vhodný pre vysoko špecifické PCR reakcie a amplifikáciu komplexných templátov, ako je vysoký obsah GC (> 60%) alebo templátov so sekundárnymi štruktúrami, ako aj pre rozsiahlu génovú detekciu atď.

Kat. Nie Veľkosť balenia
4992321 1 ml
4992322 5 x 1 ml
4992316 5 × 1 ml

Detail produktu

FAQ

Štítky produktu

Zvýraznenie produktu

One-tube Taq MasterMix (národná certifikácia High-Tech produktu)

■ 2 × HotStart Taq PCR MasterMix má zlepšenú špecificitu a citlivosť PCR reakcie a môže zosilniť komplexné templáty s vysokým obsahom GC, sekundárnou štruktúrou a podobne. Môžu byť amplifikované až 2 kópie cieľovej šablóny, čo zaisťuje presnejšie experimentálne výsledky.

■ Unikátny vzorec HotStart Taq MasterMix robí celý reakčný systém veľmi stabilným a aktivitu neovplyvní opakované zmrazovanie / rozmrazovanie alebo dlhodobé skladovanie pri 4 ° C.

■ Stabilný a účinný vopred pripravený zmiešaný roztok PCR môže urobiť operáciu rýchlou a jednoduchou, čo výrazne zníži intenzitu práce a chyby vzorkovania. V zmesi je tiež zahrnutý vysoko výkonný zosilňovač a optimalizátor PCR, ktorý znižuje požiadavky na podmienky PCR.

■ Tento výrobok má systémy obsahujúce farbivá aj bez farbív. Produkty MasterMix obsahujúce farbivá je možné po PCR priamo elektroforetizovať bez pridania plniaceho pufra.

Všetky výrobky je možné prispôsobiť pre ODM/OEM. Podrobnostikliknite na položku Prispôsobená služba (ODM/OEM)


  • Predchádzajúce:
  • Ďalšie:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Otázka: Žiadne zosilňovacie pásma

    Šablóna A-1

    ■ Šablóna obsahuje proteínové nečistoty alebo inhibítory Taq, atď. - Purifikujte templát DNA, odstráňte proteínové nečistoty alebo extrahujte templátovú DNA pomocou purifikačných súprav.

    ■ Denaturácia templátu nie je úplná - —Vhodne zvýšte denaturačnú teplotu a predĺžte denaturačný čas.

    ■ Degradácia šablóny ——Pripravte šablónu.

    A-2 Primer

    ■ Nízka kvalita primerov-Znovu syntetizujte primer.

    ■ Degradácia základného náteru --— Kvôli konzervácii rozdeľte priméry s vysokou koncentráciou do malého objemu. Vyhnite sa viacnásobnému zmrazovaniu a rozmrazovaniu alebo dlhodobému zmrazovaniu v 4 ° C.

    ■ Nesprávny dizajn primerov (napr. Dĺžka primeru nie je dostatočná, dimér vytvorený medzi primermi atď.) -Prepracovať priméry (vyhnite sa tvorbe diméru priméru a sekundárnej štruktúry)

    A-3 Mg2+koncentrácia

    ■ Mg2+ koncentrácia je príliš nízka —— Správne zvýšte Mg2+ koncentrácia: Optimalizujte Mg2+ koncentrácia sériou reakcií od 1 mM do 3 mM s intervalom 0,5 mM na stanovenie optimálneho Mg2+ koncentrácia pre každý templát a primer.

    A-4 Teplota žíhania

    ■ Vysoká teplota žíhania ovplyvňuje viazanie základného náteru a templátu. —— Znížte teplotu žíhania a optimalizujte stav s gradientom 2 ° C.

    A-5 Čas predĺženia

    ■ Krátky čas predĺženia —— Predĺžte čas predĺženia.

    Otázka: Falošne pozitívne

    Javy: Negatívne vzorky tiež ukazujú pásy cieľovej sekvencie.

    A-1 Kontaminácia PCR

    ■ Krížová kontaminácia cieľovej sekvencie alebo amplifikačných produktov ——————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————— opatrné opatrenie: vzorku Činidlá alebo zariadenie by sa mali autoklávovať, aby sa odstránili existujúce nukleové kyseliny, a existencia kontaminácie by sa mala určiť pomocou experimentov s negatívnou kontrolou.

    ■ Kontaminácia reagencií ——Reagenty rozoberte a skladujte pri nízkej teplote.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ koncentrácia je príliš nízka —— Správne zvýšte Mg2+ koncentrácia: Optimalizujte Mg2+ koncentrácia sériou reakcií od 1 mM do 3 mM s intervalom 0,5 mM na stanovenie optimálneho Mg2+ koncentrácia pre každý templát a primer.

    ■ Nesprávny dizajn primeru a cieľová sekvencia má homológiu s necieľovou sekvenciou. ——Re-design primerov.

    Otázka: Nešpecifické zosilnenie

    Javy: PCR amplifikačné pásy nie sú v súlade s očakávanou veľkosťou, buď veľké alebo malé, alebo sa niekedy vyskytujú špecifické amplifikačné pásy aj nešpecifické amplifikačné pásy.

    Základný náter A-1

    ■ Slabá špecificita primeru

    ——Re-design primer.

    ■ Koncentrácia priméru je príliš vysoká - —Vhodne zvýšte denaturačnú teplotu a predĺžte denaturačný čas.

    A-2 Mg2+ koncentrácia

    ■ Mg2+ koncentrácia je príliš vysoká —— Správne znížte koncentráciu Mg2+: Optimalizujte Mg2+ koncentrácia sériou reakcií od 1 mM do 3 mM s intervalom 0,5 mM na stanovenie optimálneho Mg2+ koncentrácia pre každý templát a primer.

    A-3 Termostabilná polymeráza

    ■ Nadmerné množstvo enzýmu - Množstvo enzýmu primerane znížte v intervaloch 0,5 U.

    A-4 Teplota žíhania

    ■ Teplota žíhania je príliš nízka —— Vhodne zvýšte teplotu žíhania alebo použite dvojstupňovú metódu žíhania

    A-5 PCR cykly

    ■ Príliš veľa cyklov PCR - Znížte počet cyklov PCR.

    Otázka: Nefarebné alebo rozmazané pásy

    Základný náter A-1—— Slabá špecifickosť —— Znovu navrhnite základný náter, zmeňte polohu a dĺžku základného náteru, aby ste zvýšili jeho špecifickosť; alebo vykonajte vnorenú PCR.

    DNA templátu A-2

    ——Šablóna nie je čistá —— Purifikujte templát alebo extrahujte DNA purifikačnými súpravami.

    A-3 Mg2+ koncentrácia

    ——Mg2+ koncentrácia je príliš vysoká —— Správne znížte Mg2+ koncentrácia: Optimalizujte Mg2+ koncentrácia sériou reakcií od 1 mM do 3 mM s intervalom 0,5 mM na stanovenie optimálneho Mg2+ koncentrácia pre každý templát a primer.

    A-4 dNTP

    ——Koncentrácia dNTP je príliš vysoká —— Znížte vhodne koncentráciu dNTP

    A-5 Teplota žíhania

    —— Príliš nízka teplota žíhania —— Vhodne zvýšte teplotu žíhania

    A-6 Cykly

    ——Príliš veľa cyklov ——Optimalizujte počet cyklov

    Otázka: Koľko templátovej DNA by sa malo pridať do 50 μl reakčného systému PCR?
    ytry
    Otázka: Ako zosilniť dlhé fragmenty?

    Prvým krokom je výber vhodnej polymerázy. Bežná Taq polymeráza nemôže byť skontrolovaná kvôli nedostatku aktivity 3'-5 'exonukleázy a nesúlad výrazne zníži účinnosť predĺženia fragmentov. Bežná Taq polymeráza preto nemôže účinne amplifikovať cieľové fragmenty väčšie ako 5 kb. Taq polymeráza so špeciálnou modifikáciou alebo iná vysoko verná polymeráza by mala byť zvolená tak, aby sa zlepšila účinnosť extenzie a splnili potreby amplifikácie dlhých fragmentov. Okrem toho amplifikácia dlhých fragmentov tiež vyžaduje zodpovedajúcu úpravu konštrukcie priméru, času denaturácie, času predĺženia, pH pufra atď. K lepšiemu výťažku môžu obvykle viesť priméry s 18 až 24 bp. Aby sa zabránilo poškodeniu templátu, denaturačný čas pri 94 ° C by sa mal skrátiť na 30 sekúnd alebo menej na cyklus a čas na zvýšenie teploty na 94 ° C pred amplifikáciou by mal byť kratší ako 1 minúta. Efektívnu amplifikáciu dlhých fragmentov môže zaistiť aj nastavenie teploty predĺženia na približne 68 ° C a návrh času predĺženia podľa rýchlosti 1 kb/min.

    Otázka: Ako zlepšiť vernosť amplifikácie PCR?

    Chybovú rýchlosť amplifikácie PCR je možné znížiť použitím rôznych DNA polymeráz s vysokou vernosťou. Spomedzi všetkých doposiaľ nájdených Taq DNA polymeráz má enzým Pfu najnižšiu chybovosť a najvyššiu vernosť (pozri priloženú tabuľku). Okrem výberu enzýmov môžu vedci ďalej znižovať rýchlosť mutácií PCR optimalizáciou reakčných podmienok vrátane optimalizácie zloženia pufra, koncentrácie termostabilnej polymerázy a optimalizácie počtu cyklov PCR.

    Napíšte sem svoju správu a pošlite nám ju