Súprava RNAclean

A-1 Bunková lýza alebo homogenizácia nie sú dostatočné

---- Znížte používanie vzorky, zvýšte množstvo lyzačného pufra, predĺžte homogenizáciu a čas lýzy.

A-2 Množstvo vzorky je príliš veľké

---- Znížte množstvo použitej vzorky alebo zvýšte množstvo lyzačného pufra.

A-1 Nedostatočná lýza alebo homogenizácia buniek

---- Znížte používanie vzorky, zvýšte množstvo lyzačného pufra, predĺžte homogenizáciu a čas lýzy.

A-2 Množstvo vzorky je príliš veľké

---- Pozrite sa prosím na maximálnu kapacitu spracovania.

A-3 RNA nie je zo stĺpca úplne eluovaná

---- Po pridaní vody bez RNázy ju nechajte niekoľko minút odstrediť.

A-4 Etanol v eluente

---- Po opláchnutí znova centrifugujte a čo najviac odstráňte premývací pufer.

A-5 Bunkové kultivačné médium nie je úplne odstránené

---- Pri zbere buniek dbajte na to, aby ste kultivačné médium čo najviac odstránili.

A-6 Bunky uložené v obchode RNAstore nie sú účinne centrifugované

---- Hustota skladu RNA je väčšia ako priemerné kultivačné médium pre bunky; preto by sa mala zvýšiť odstredivá sila. Odporúča sa centrifugovať pri 3 000 x g.

A-7 Nízky obsah RNA a početnosť vo vzorke

---- Pomocou pozitívnej vzorky určte, či je nízky výťažok spôsobený vzorkou.

A-1 Materiál nie je čerstvý

---- Čerstvé tkanivá by sa mali ihneď uložiť alebo ihneď vložiť do kvapalného dusíka do činidla RNAstore, aby sa zabezpečil extrakčný účinok.

A-2 Množstvo vzorky je príliš veľké

---- Znížte množstvo vzorky.

A-3 RNáza kontaminovanán

---- Napriek tomu, že pufor dodávaný v súprave neobsahuje RNázu, je možné počas extrakcie RNázu ľahko kontaminovať a malo by sa s ním zaobchádzať opatrne.

A-4 Znečistenie elektroforézou

---- Vymeňte elektroforetický tlmivý roztok a uistite sa, že spotrebný materiál a nakladací pufor nie sú kontaminované RNázou.

A-5 Príliš veľa zaťaženia na elektroforézu

---- Znížte množstvo náplne vzorky, zaťaženie každej jamky by nemalo presiahnuť 2 μg.

A-1 Množstvo vzorky je príliš veľké

---- Znížte množstvo vzorky.

A-2 Niektoré vzorky majú vysoký obsah DNA a môžu byť ošetrené DNázou.

---- Vykonajte spracovanie získanej RNA roztokom DNázy bez RNázy a RNA sa môže priamo použiť na následné experimenty po ošetrení alebo sa môže ďalej purifikovať pomocou súprav na purifikáciu RNA.

V prípade sklárskeho tovaru pečieme pri 150 ° C 4 hodiny. Pri plastových nádobách ponorených do 0,5 M NaOH na 10 minút, potom dôkladne opláchnutých vodou bez RNázy a potom sterilizovaných na úplné odstránenie RNázy. Činidlá alebo roztoky použité v experimente, najmä voda, nesmú obsahovať RNázu. Na všetky reagentové prípravky použite vodu bez RNázy (pridajte vodu do čistej sklenenej fľaše, pridajte DEPC na konečnú koncentráciu 0,1% (V/V), pretrepávajte cez noc a autoklávujte).